Новое в клонировании ДНК, Методы, Гловер Д., 1989

Новое в клонировании ДНК, Методы, Гловер Д., 1989.

   Книга авторитетного коллектива авторов из Англии, США и ФРГ — третий том практического руководства по молекулярной биологии и генной инженерии. Описана техника использования различных векторов, новые эукариотические экспрессирующие системы, способы выделения некоторых продуктов экспрессии. Два первых тома руководства выпущены издательством «Мир» в 1988 г. (в одной книге).
Для молекулярных биологов, генетиков, биотехнологов.




Выбор РНК-полимеразы.
Выбор РНК-полимеразы может быть продиктован несколькими соображениями — в том числе выбором вектора. Однако следует иметь в виду следующее. РНК-полимеразы фагов Т7 и ТЗ обычно производят путем экспрессии клонированных генов. Поэтому они значительно дешевле РНК-полимеразы SP6 и их можно использовать в больших количествах. Вместе с тем РНК-полимеразы фагов Т7 и 73 обладают перекрестной специфичностью, особенно при низких концентрациях солей, при которых полимераза фага Т7 способна инициировать транскрипцию на ТЗ-промоторе и наоборот. Вследствие этого векторы, содержащие оба промотора, могут обеспечивать синтез само-комплементарной РНК. Это может и не мешать; например, для матриц, обычно используемых при синтезе РНК-транскриптов, терминированных в заданной точке, такое встречное инициирование транскрипции может приводить к образованию транс-криптов, имеющих ничтожно малую длину. В наших опытах, если судить по включению внесенной метки, полимераза SP6 оказывается всегда менее эффективной, чем полимераза Т7. Возможно, это объясняется лимитирующим количеством радиоактивных нуклеозидтрифосфатов (NTP), используемых в реакциях транскрипции. При низкой концентрации нуклеотидов полимеразы Т7 и ТЗ прекращают транскрипцию в пределах первых 15 оснований, считая от сайта инициации. Ферменты сходят с матрицы, происходит реинициация и возобновляется синтез неполноценных коротких транскриптов.

В обычно используемых векторах на основе фагов Т7 и ТЗ при транскрипции этого начального участка не требуется включения UTP. Поэтому они эффективно транскрибируются даже при низких концентрациях этого нуклеотида ([9] и W. F. McAllister личное сообщение). До сих пор неизвестно, обладает ли аналогичными свойствами полимераза SP6. Как бы то ни было при использовании промотора фага SP6 транскрипция первых 15 оснований требует присутствия всех четырех нуклеотидов, и это, по всей вероятности, уменьшает эффективность транскрипции матрицы полимеразой SP6 в присутствии низких концентраций UTP. Если же транскрипция первых 15 оснований прошла успешно, то вероятность терминации и реинициации сильно уменьшается.

Оглавление.
От редактора перевода.
Предисловие.
Список авторов.
Глава 1. Применение плазмид, содержащих промоторы, специфические для фаговых РНК-полимераз.
Глава 2. Выбор и использование космидных векторов.
Глава 3. Генетические подходы к клонированию, модификации и характеристике индивидуальных космидных библиотек клонов.
Глава 4. Выделение эукариотических полипептидов, продуцируемых в клетках.
Глава 5. Получение и очистка поликлональных антител к гетерологичным фрагментам гибридных белков, содержащих р-галактозидазу.
Глава 6. Получение моноклональных антител к гибридным белкам, продуцируемым в клетках.
Глава 7. Экспрессия и секреция продуктов гетерологичных генов в дрожжах.
Глава 8. Использование амплифицирующихся векторов для экспрессии клонированных генов в клетках млекопитающих.
Глава 9. Ретровирусные векторы.
Глава 10. Получение трансгенных мышей путем микроинъекции клонированной ДНК в оплодотворенные яйцеклетки.
Список использованных сокращений.
Предметный указатель.



Бесплатно скачать электронную книгу в удобном формате, смотреть и читать:
Скачать книгу Новое в клонировании ДНК, Методы, Гловер Д., 1989 - fileskachat.com, быстрое и бесплатное скачивание.

Скачать pdf
Ниже можно купить эту книгу по лучшей цене со скидкой с доставкой по всей России.Купить эту книгу


Скачать - pdf - Яндекс.Диск.




Теги: учебник по биологии :: биология :: Гловер :: клонирование :: генетика :: ДНК